實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
結(jié)腸癌細(xì)胞；COLO394[COLO394] | 貼壁生長 | EY-X63681 |
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細(xì)胞名稱 結(jié)腸癌細(xì)胞；COLO394[COLO394]
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況: C7
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
1,2-Dimethylquinolin-4-one-3-carboxylic acid
CAS No.：73281-83-1
中文名：
分子式：C12H11NO3
澤瀉F 訂購|咨詢 核連蛋白1(NUCB1) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
相思 訂購|咨詢 核連蛋白2(NUCB2) 規(guī)格： HPLC≥95%;20mg
白花前胡素 訂購|咨詢 核連蛋白2(NUCB2) 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg
山楂 訂購|咨詢 核苷還原酶M1(RRM1) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
黃芪黃 訂購|咨詢 核苷還原酶M1(RRM1) 規(guī)格： HPLC≥70%;20mg
維生素A 訂購|咨詢 核苷酶(NP) 規(guī)格： HPLC≥95%;20mg
煙 訂購|咨詢 核轉(zhuǎn)錄因子Y亞基γ(NFYC) 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg
L甘 訂購|咨詢 核呼吸因子1(NRF1) 規(guī)格： HPLC≥99%;200mg
構(gòu)樹A 訂購|咨詢 核受體亞家族1D組成員2(NR1D2) 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg
11O羅漢果苷V 訂購|咨詢 核受體亞家族3C組成員1(NR3C1) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
遠(yuǎn)志山III 訂購|咨詢 核受體亞家族3C組成員1(NR3C1) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
基酞 訂購|咨詢 核受體亞家族3C組成員1(NR3C1) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
銀杏內(nèi)酯J 訂購|咨詢 核受體相關(guān)蛋白1(NURR1) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
水仙苷 訂購|咨詢 核氧還原蛋白(NXN) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
矢素3O葡萄糖苷 訂購|咨詢 核基質(zhì)蛋白4(NMP4) 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg
羥基A 訂購|咨詢 核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(RFT2) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
香蒲新苷 訂購|咨詢 核黃素激酶(RFK) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
藥根 訂購|咨詢 核外切酶1(EXO1) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
SFR19 剪接因子，精/絲豐富19 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Carboxymethyl cellulose
SOX11 轉(zhuǎn)錄因子SOX11蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Fludarabine
SVH/ARMC10 肝癌蛋白剪接變異體蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Fludarabine
THRSP 甲狀腺激素反應(yīng)蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml G418 disulfate,Geneticin
TIMM17A 線粒體內(nèi)膜轉(zhuǎn)位酶抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Erlotinib
TMEM49 跨膜蛋白49抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml NAcetylcysteine
TMS1/ASC 凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Zopiclone
TPD52/Prostate and colon associated protein 前列腺癌和結(jié)腸癌相關(guān)蛋白 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Zopiclone
若丹明123 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Rhodamine123 含量:BR，95%
弱金雞 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Cinchonine 含量:AR
噻吩羧肼 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:TCH 含量:AR，99.5%
噻橙 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:ThiazoleOrange 含量:試劑級，98%
三(2羰基基) 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:TCEP 含量:金屬滴定指示劑
三(3甲基丁基) 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Triisoamylamine 含量:高純，98%
三(羥甲基)基甲 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:TRISHC1 含量:AR
三基亞 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Triphenylphosphite 含量:高純，98%
*基樹脂 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Tritylchlorideresin 含量:BR
三膦 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Triphenylphosphine 含量:BR，98%
人結(jié)腸癌細(xì)胞；COLO394[COLO394]劉榮標(biāo)氏鞭毛染色液規(guī)格：5ml*8用途：用于鞭毛染色
Casman瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于嗜血菌屬的分離培養(yǎng)
ONPG規(guī)格：20支用途：用于副溶血性弧菌的β-半乳糖苷酶試驗(yàn)
Iron瓊脂規(guī)格：250g用途：用于產(chǎn) H2S菌的分離培養(yǎng)
瓊脂培養(yǎng)基N規(guī)格：250g用途：用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(yǎng)
西蒙氏枸櫞鹽培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于腸道菌的檸檬鹽利用試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
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