公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
肝癌細胞;HHCC | 貼壁生長 | EY-X63469 |
細胞名稱 肝癌細胞;HHCC
形態特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況:
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養法(-)
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
己烷雌酚;去氫己雌酚SDF1 (D32F9) Rabbit mAb1,5-二氟-2,二
GTP;鳥苷-5‘-三酸鈉鹽Btk (C82B8) Rabbit mAb二亞酸甲酯
-5’-酸二鈉鹽SFRP1 (D5A7) Rabbit mAb綠原酸
尿苷-5’-二酸鈉鹽(UDP)GATA-1 (D52H6) XP® Rabbit mAb雙十二烷基二甲基
5’-尿苷酸二鈉(UMP)GATA-1 (D52H6) XP® Rabbit mAb間二(三氟甲基)
dAMP-Na2;脫氧腺苷酸二鈉eNOS (D8A6N) Rabbit mAb對叔丁基芐
ATP.Na2; 腺苷-5’-三酸二鈉鹽水合物β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjuga)三氟甲基水楊酸
阿帕替尼甲磺酸鹽CD7 Antibody1-*基咪唑-甲
cAMP;環酸腺苷,環腺苷酸,環腺苷CD27 (O323) Mouse mAb (FITC Conjuga)溴-1-丁
環酸腺苷,環腺苷酸(標準品)Phospho-Btk (Ser180) (3D3) Mouse mAbN'-Cbz-L-
PR-619; 2,6-二氨基-3,5-二硫基吡啶GLI1 (C68H3) Rabbit mAb1H-咪唑-4,5-二甲酸二甲酯
5'-胞苷酸(CMP)GLI1 (C68H3) Rabbit mAb紫杉
5-甲酰水楊酸Rab11 Antibody
D-核糖-5-酸二鈉鹽Phospho-NPM (Thr199) Antibody氟-甲氧基溴芐
蘇木色精,蘇木素NPM Antibody3,4,5-三吡啶
核苷酸5’-一酸腺苷鈉鹽;AMP鈉鹽Bit1 Antibody2--6-基吡啶
CTP.Na2;胞苷-5’-三酸二鈉鹽SLP-76 (D1R1A) Rabbit mAb (PE Conjuga)卓
5-甲基尿苷FABP4 (D25B3) XP® Rabbit mAb氧基鹽酸鹽
2,2’-脫水尿苷;環尿苷FABP4 (D25B3) XP® Rabbit mAb三氟磺酸甲酯
X-gal;5-溴-4-3吲哚基β-D半糖* Antibody2-氨基-6-吡
X-GlcA ;5-溴--吲哚基-β-D-葡糖苷酸環己鹽CD8α (2.43) Rat mAb (FITC Conjuga)2-氨基-5-吡
X-GlcA ;5-溴--吲哚基-β-D-葡糖苷酸環己鹽Arf6 Antibody1,12-二溴十二烷
TOPS;N-基-N-(磺基)-鈉鹽Rab5 (C8B1) Rabbit mAb三氟甲磺酸鋰
TBHBA;2,4,6-三溴-羧基甲酸Rab5 (C8B1) Rabbit mAbBOC-1,丁
N-基-N-(磺基)-甲氧基鈉鹽Phospho-GSK-3β (Thr390) Antibody1-溴-2-丁炔
TOOS;N-基-N-(2-羧基-磺基)-鈉鹽PP2C-α (D18C10) XP® Rabbit mAb6-溴-2-萘甲酸甲酯
TMB.HCL;3,3’,5,5’-四甲基聯鹽酸鹽PP2C-α (D18C10) XP® Rabbit mAb2-氨基-羥基吡啶
TMB-PS;N-(磺基)-3,3',5,5'-四甲基聯鈉鹽(超純)LARS (D7Q4Q) Rabbit mAb噻唑-甲
ADOS;N-基-N-(2-羧基-磺基)-甲氧基鈉鹽PIAS1 (D33A7) XP® Rabbit mAb6-溴吡啶-2-甲
熒光PIAS1 (D33A7) XP® Rabbit mAb溴-2-甲
AEC;氨基-9-基咔唑Mer (D21F11) XP® Rabbit mAb (Sepharose®Bead Conjuga)四丁基氫化銨
-1-萘酚(4C1N)Erk5 (D23E9) Rabbit mAb甲氧基-2-甲酸
對甲藍(BCIP)Zyxin Antibody2,吡啶二甲酸
對酸二鈉(PNPP)Phospho-c-Cbl (Tyr731) Antibody1-辛-
ONPG;鄰-β-D-半糖苷Phospho-c-Cbl (Tyr731) Antibody2,6-二甲氧基甲
親和素;卵白素來源于雞蛋白Phospho-c-Cbl (Tyr774) Antibody3,5-二甲基-溴吡唑
PC3] F12K優質胎牛血清,10%
肝癌細胞;HHCC人高遷移率族蛋白1(HMG-1)ELISA試劑盒MHBELISAKit產品規格:48T/96T。
人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA試劑盒MHBELISAKit產品規格:48T/96T。
人水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒MHC/BELISAKit產品規格:48T/96T。
人水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒MHC/BoLAELISAKit產品規格:48T/96T。
人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒MHC/DLAELISAKit產品規格:48T/96T。
人水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒MHC/ELAELISAKit產品規格:48T/96T。
人水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒MHC/GPLAELISAKit產品規格:48T/96T。
人髓磷脂性蛋白(MBP)ELISA試劑盒MHC/OLAELISAKit產品規格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。