實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
大鼠雪旺細胞;RSC96 | 貼壁生長 | EY-X63527 |
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細胞名稱 大鼠雪旺細胞;RSC96
形態特性: 神經元
生長特性: 貼壁生長
特征特性: RSC96細胞株是原代培養的大鼠雪旺細胞經長時間培養后自發轉化而成的[PubMed:9766530]。2002年十二月提交到ATCC的培養物污染了支原體。其后代通過BM細胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后六周,用Hoechst染色、PCR和標準培養測試進行支原體檢測。結果都呈陰性。
培養條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優質胎牛血清,10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況: PN5
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
freeze-dried細胞名稱: EB病轉化的人B淋巴細胞;HH-16 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
Penicillium thomii Maire, anamorph細胞名稱: EB病轉化的人B淋巴細胞;HH-01 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
Chaetomium tenuissimum Sergejeva, teleomorph細胞名稱: EB病轉化的人B淋巴細胞;KMY1008 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
Homo sapiens, human細胞名稱: EB病轉化的人B淋巴細胞;KMY1022 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
Salmonella enterica subsp.enterica (e ..細胞名稱: EB病轉化的人B淋巴細胞;KMY1036 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
Staphylococcus epidermidis (Winslow and Win ..細胞名稱: EB病轉化的人B淋巴細胞;KMY1002 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
frozen細胞名稱: 人正常前列腺基質永生化細胞;WPMY-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優質胎牛血清,5%
frozen細胞名稱: 人正常前列腺上皮細胞;RWPE-1 這株細胞的基本培養基作為Invitrogen(GIBCO)提供的kit的部分:角化細胞無血清培養基K-SFM,kit目錄號17005-042。隨kit提供這株細胞生長所需的兩種添加劑(牛垂體提取物BPE及人重組表皮生長因子EGF)。配制*生長培養基,需添加以下成分:0.05mg/mlBPE–隨K-SFM提供5ng/mlEGF-隨K-SFM提供。
dried細胞名稱: 人臍靜脈細胞融合細胞;EA.hy926 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優質胎牛血清,10%
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 人肝永生化細胞;THLE-3 CloneticsCorporation,Walkersville,MD21793的BEGM培養基(目錄號CC3170)。套裝包含了500毫升基本培養基及分別凍存的添加劑,我們不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5ng/mlEGF,70ng/mlPhosphoethanolamine。
Verticillium fungicola (Preuss) Hassebrauk, ..細胞名稱: 人胚肺成纖維細胞;IMR-90 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優質胎牛血清,10%
Marchandiomyces corallinus (Roberge) Dieder ..細胞名稱: 人胚胎肺成纖維細胞;WI-38 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優質胎牛血清,10%
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠胰島內皮細胞;MS1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優質胎牛血清,5%
Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠腎小球系膜細胞;SV40MES13 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優質胎牛血清,5%;14mMHEPES
Rattus norvegicus, rat spleen細胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細胞;Psi2DAP DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優質胎牛血清,10%
dried細胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)牛血清,10%
大鼠雪旺細胞;RSC96β(β-HCG)ELISA試劑盒PL/FbnELISAKit產品規格:48T/96T。
(HCG)ELISA試劑盒PL12/AlaRSELISAKit產品規格:48T/96T。
人C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒PL-A2ELISAKit產品規格:48T/96T。
人胰島素(INS)ELISA試劑盒PL-A2ELISAKit產品規格:48T/96T。
人新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒PL-A2ELISAKit產品規格:48T/96T。
人游離*狀腺原氨(Free-T3)ELISA試劑盒PLAPELISAKit產品規格:48T/96T。
人游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒PLAUR/uPARELISAkit產品規格:48T/96T。
人甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒PLAUR/uPARELISAkit產品規格:48T/96T。