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產品名稱:
結腸癌轉基因細胞;RKO-AS45-1
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  結腸癌轉基因細胞;RKO-AS45-1的詳細資料:

公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:

產品名稱

生長特性

貨號

結腸癌轉基因細胞;RKO-AS45-1

貼壁生長

EY-X63567

細胞名稱  結腸癌轉基因細胞;RKO-AS45-1
形態特性: 上皮細胞

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 人的cDNA中編碼GADD45的開放閱讀框到表達載體pCMV.3中,轉染結腸癌細胞RKO,建立了RKO-AS45-1細胞株。該細胞含有穩定整合巨細胞病毒(CMV)啟動子的表達載體。RKO-AS45-1細胞系和它的母系RKO一起可用于Gadd45對DNA修復、凋亡和藥物敏感性研究。

培養條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優質胎牛血清,10%

傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。

傳代情況: PN5

凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 陰性
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法; 
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理; 
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率; 
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Colletotrichum fioriniae (Marcelino et Goul ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;MA-1G2 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

frozen細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;14E4 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

frozen細胞名稱: 中國倉鼠卵巢細;胞CHO-S/K7OE10-1D6 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Methanococcus sp.細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;11A7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

freeze-dried細胞名稱: 中國倉鼠卵巢細胞;CHO-S/H9C2 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠潘氏細胞雜交瘤細胞株;GCLP MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Agaricus bisporus (Lange) Imbach, teleomorph細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;4-1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;VZV-gE-4A2 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;12H11 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠骨髓雜交瘤細胞株;8A3A10 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;PITPNM3mAb MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Corynebacterium ammoniagenes (Cooke and Kei ..細胞名稱: 小鼠骨髓雜交瘤細胞株;3G12 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠骨髓雜交瘤細胞株;2F8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;6H7D11 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;WV-TT-05 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human colon細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株;WV-SPA-03 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
結腸癌轉基因細胞;RKO-AS45-1人庚型肝炎病IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒sRANKLELISAKit產品規格:48T/96T。

人乙型肝炎病前S2抗原(HBVpreS2Ag)ELISA試劑盒SRBELISAKit產品規格:48T/96T。

人乙型肝炎病前S2抗體(HBVpreS2Ab)ELISA試劑盒SRELISAKit產品規格:48T/96T。

人內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒SRF/IFELISAKit產品規格:48T/96T。

人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒SRPELISAKit產品規格:48T/96T。

人細胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒ssDNAELISAKit產品規格:48T/96T。

人內皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒SSELISAKit產品規格:48T/96T。

人內素(ET)ELISA試劑盒SSELISAKit產品規格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

 

產品相關關鍵字: 結腸癌轉基因細胞 RKO-AS45-1
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