實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
高轉移肝癌細胞;HCCLM3 | 貼壁生長 | EY-X63556 |
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細胞名稱 高轉移肝癌細胞;HCCLM3
形態特性: 上皮細胞樣;胞質內有顆粒
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 用人肝癌細胞株MHCC97-H接種裸鼠,進行3次肺轉移篩選,取肺轉移瘤建成皮下接種后高度自發性肺轉移的肝癌細胞系。
培養條件:
傳代方法:
傳代情況: PN
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
corylophilumFMOC-L-2-溴苯氨酸Human SFXN1 ELISA Kit
犬腎;MDCK/IgR注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用FMOC-D-炔基Human SFXN2 ELISA Kit
狗腎隆突型;MDCK superdome拉丁屬名: Bacillus circulans5-氟-2-甲基芐氯Human SFXN3 ELISA Kit
犬腎;MDCK(NBL-2)拉丁屬名: sergenti氘代乙Human BCO2(Beta,beta-carotene 9′,10′-oxygenase) ELISA Kit
狗肺成纖維樣;DogL1拉丁屬名: Zygosaccharomyces rouxii氘代乙Human SGCE ELISA Kit
狗腎;MDCK NS1拉丁屬名: Altererythrobacter epoxidivorans(R)-(+)-2,2′,6,6′-四甲氧基-4,4′-雙(二苯基膦)-3,3′-聯吡啶Human SGF29 ELISA Kit
犬細支氣管上皮;CBE1拉丁屬名: Pseudomonas mandelii5,10,15,20-四(4-甲氧苯基)卟啉Human SGCG ELISA Kit
兔主動脈平滑肌;SMC拉丁屬名: Burkholderia cepacia松弛素CHuman SERPINB8 ELISA Kit
家兔肌肉來源拉丁屬名: Trametes pubescensL-生物喋呤Human SERPINB12 ELISA Kit
家兔皮膚來源拉丁屬名: Clostridium acetobutylicumL-生物喋呤Human SERPIND1(Serpin family D member 1) ELISA Kit
幼兔骨髓間充質干注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用1-芐基-3-羥基-1H-吲唑Human SERPINB9 ELISA Kit
幼兔腎上皮樣注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于人類或動物的臨
高轉移肝癌細胞;HCCLM3人肺表面活性物質相關蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒sEPCRELISAKit產品規格:48T/96T。
人補體7(C7)ELISA試劑盒sEPCRELISAKit產品規格:48T/96T。
人補體片段3c(C3c)ELISA試劑盒sE-selectinELISAKit產品規格:48T/96T。
人C4結合蛋白(C4BP)ELISA試劑盒sE-selectinELISAKit產品規格:48T/96T。
人蛋白激酶A(PKA)ELISA試劑盒sE-selectinELISAKit產品規格:48T/96T。
人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA試劑盒sE-selectinELISAKit產品規格:48T/96T。
人胰島細胞抗原2抗體/蛋白酪氨磷酶抗體(IA-2A)ELISA試劑盒sE-selectinELISAKit產品規格:48T/96T。
人胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA試劑盒sFAS/Apo-1ELISAKit產品規格:48T/96T。